RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS, ENZIMAS Y EXTRACCION DEL ADN

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS, ENZIMAS Y EXTRACCION DEL ADN 

• RESUMEN: 

Este artículo presenta algunas  de las moléculas más importantes en los seres vivos, el objetivo principal fue extraer, reconocer y presenciar moléculas  como proteínas, enzimas y ADN. Para realizar este objetivo se utilizó la coagulación de las proteínas para poder vivenciar la desnaturalización  de ellas, también mediante otra experiencia miramos algunas actividades de varias enzimas, se utilizó una sencilla técnica para poder extraer el ADN  de un tejido animal y confirmar su estructura fibrilar. En los resultados pudimos observar como las proteínas y los péptidos producen reacción de biuret. Utilizándose el azufre de los aminoácidos se forma el sulfato de plomo que nos sirvió para identificar proteínas que tienen aminoácidos y azufre  en su composición. En conclusión en todo este proceso se observó cómo actúan las moléculas  en cada parte de los seres vivos, y en cada parte de nuestros cuerpos, también se miró sus reacciones en cada procedimiento diferente que se trabajó, también  sirvió para entender mejor las reacciones que pueden ocurrir y que ocurren en nuestros cuerpos y como las enzimas trabajan el nuestro metabolismo y como solucionan los problemas que nos podrían afectar. 

• INTRODUCCION: 

Para analizar algunas moléculas tales como proteínas, enzimas y ADN se utilizaron varias técnicas para poder identificar cada una de ellas. En el reconocimiento de las proteínas se identificó algunas formaciones de coágulos al ser calentadas  a altas temperaturas, superiores a los 70°c, en este caso utilizamos clara de huevo para su identificación.También se pudo ver que en reacciones xantoproteica es debido a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando laproteína fue tratada con ácido nítrico concentrado. En otro caso la proteína se puso en contacto con álcali concentrado, y se pudo identificar una sustancia compleja denominada biuret. 

Para la existencia de enzimas se utilizó trozos de hígado y se le agrego agua oxigenada, se pudo identificar un intenso burbujeo debido al desprendimiento de oxígeno. 

Las proteínas se desnaturalizan sometiéndolas a altas temperaturas, para la identificaron de esta propiedad fundamental de proteínas que puede ser llamada también desnaturalización de la catalasa, NO hubo reacción. 

Para poder vivenciar he identificar la actividad de otra enzima como la amilasa o ptialina se utilizó la saliva ya que esta está presente allí, se le añadió una solución diluida de almidón y se pudo identificar  que el resultado fue positivo ya que No hay almidón, porque la amilasa de la saliva ha hidrolizado el almidón transformándolo en glucosa, por eso la reacción de fehilin fue positiva.  

En el otro tubo se pudo ver que la reacción de polisacáridos dio negativo, ya que el almidón (polisacárido) se ha hidrolizado. 

En la reacción del lugol para la identificación de polisacáridos se colocó en un tubo de ensayo  3 cc. De glúcido en esto  se identificó un color azul-violeta que dio como resultado positivo. Se identificó que esto se debe a que el yodo se introdujo  entre las espiras de la molécula de almidón, no fue por tanto una verdadera reacción química si no que se formó un compuesto de inclusión que modifico las propiedades físicas de esa molécula apareciendo la coloración azul-violeta. 

En extracción del ADN de un tejido animal se pudo ver el aspecto que presenta y se pudo confirmar su estructura fibrilar, y en que núcleo del ADN se encuentra replegado. 

• METODOS: 

• Reconocimiento de proteínas: 

• Coagulación de proteínas: 

• Colocar un tubo de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo.  
• Añadir 5 gotas de ácido acético y calentar el tubo a la llama del mechero. 

• Reacciones coloreadas:  

1. Reacción xatoproteica:  

• Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. De solución (clara de huevo) 
• Añadir 1cc. De HNO3 concentrado 
• Calentar al baño maría a 100°c. 
• Enfriar en agua maría 
• Añadir gota a gota de solución de hidróxido de sodio  al 40% 

2. Reacción de biuret: 

• Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3cc.de albumina de huevo. 
• Añadir 2cc.de solución de hidróxido sódico al 20% 

• A continuación una coloración violeta-rosácea característica 

3. Reacción de los aminoácidos azufrados: 

• Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3cc. De albumina de huevo8 clara de huevo) 
• Añadir 2 cc. De solución de hidróxido sódico al 20% 
• Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5% 
• Calentar el tubo hasta ebullición. 

• Enzimas: 

• Reconocimiento de catalasa: 

• Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado  
• Añadir 5 mililitros de agua oxigenada 

• Desnaturalización de la catalasa: 

• Colocar en un tubo de ensayo varios trocitos de hígado 
• Añadir agua para hervir las muestras .Hervir durante unos minutos. 
• Después de este tiempo, retirar el agua sobrante 
• Añadir el agua oxigenada 
• Observar el resultado 

• Hidrolisis del almidón: 

• Poner en una gradilla cuatro tubos de ensayo, numerados del al 4. 
• Añadir en cada tubo 5 mililitros de una solución diluida  de almidón 
• A los tubos 3 y 4 añadir una pequeña cantidad da saliva. 
• En el tubo uno haz la reacción de fehling, en el tubo dos realizar la reacción de lugol.  
• Los tubos 3 y 4 al que le hemos echado la saliva, ponerlos en un vaso de precipitado la baño maría,  controlando la temperatura del agua para que no hierva, ya que lo que intentamos es que la enzima de la saliva trabaje a unos 37:CD. Dejarlo unos 15 minutos. 

• Reacción de fehiling: 

• Tomar una muestra que se quiera analizar (normalmente una cantidad de 3 cc.) 
• Añadir 1 cc. De fehling ay1 cc. De fehling B. El líquido del tubo de ensayo adquirirá un  fuerte color azul. 

• Calentar el tubo al baño maría o directamente en un mechero de laboratorio. 
• La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo ladrillo 
• La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso 

• Reacción del lugol: 

• Poner en un tubo de ensayo unos 3 cc. Del lugol a investigar. 
• Añadir unas gotas del lugol. 
• Si la disolución del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta, la reacción es positiva. 

• Extracción del ADN: 

• Triturar medio hígado de pollo en un mortero.  
• Añadir arena que al triturar se puedan romper las membranas y queden  los núcleos sueltos. 
• Añadir al triturado de pollo, 50 centímetros cúbicos de agua. Remover hasta hacer una especie de papilla o puré. 
• Filtrar varias veces sobre una tela para separar los restos de tejido que hayan quedado por romper  
• Medir el volumen del filtro con una probeta. 
• Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M. con esto conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina. 
• A continuación se añade 1 centímetro de  cubico de SDS. La acción de este detergente es formar un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así nos quedara el ADN libre de las proteínas que tiene asiciadas. 
• Añadir mediante una pipeta 50 centímetros cúbicos de alcohol de 69. Hay que hacerlo de forma que el alcohol resbale por las paredes del baso y se formen dos capas. 

• Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma dirección. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación de muchas fibras de ADN.  

• RESULTADOS Y ANALISIS: 

• Reconocimiento de proteínas: 

• Coagulación de proteínas: 

La clara de huevo (proteína) dio como resultado una formación de coagulación al aplicarle ácido acético. 

 

Este resultado es un proceso irreversible  se bebe a su desnaturalización y debido alácido acético que se le añadió  que al actuar sobre la proteína la desordenan por la destrucción de su estructura terciaria y cuaternaria. También dio este resultado al ser calentada a altas temperaturas. 

• Reacciones coloreadas: 

1. Reacción de xantoproteica: 

Da ese color debido a la formación de un compuesto aromático de color amarillo ya que la proteína fue tratada con ácido nítrico concentrado.  

 

La prueba da positiva en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos  especialmente en presencia de tirosina. si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro. 

Seempleó la presencia de proteínas solubles en una solución empleando ácido nítrico concentrado. 

2. Reacción de biuret: 

En esta práctica da como resultado una coloración violeta característica 

 

La proteína tiene contacto con una solución de sulfato cúprico diluida. Esta reacción la producen las proteínas y los péptidos. Pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia de del enlace péptido que se destruye al liberarse los aminoácidos. 

3. Reacción de los aminoácidos azufrados: 

• Enzimas:  

• Reconocimiento de la catalasa: 

Vemos en esta práctica la existencia de la enzima. Y Se puede ver el resultado de la reacción. 

 

Podemos ver que se produce un intenso burbujeo esto es debido  al desprendimiento de oxígeno. 

• Desnaturalización de la catalasa: 

En esta práctica vemos como se desnaturaliza la catalasa químicamente una proteína, el resultado fue ver como se desnaturalizo al someterla a altas temperaturas  

. 

Al final no tuvo ninguna reaccion debido a que al pereder la estructura tercuaria , perdio tambien la funcion y como consecuencia su funcion catalitica, por lo que no pudo descomponer el agua oxigenada y por esa razon no se observo ningun tipo de reaccion. 

• Hidrolisis de almidon: 

El tubo los tubos se les agrego una solución diluida de almidón, al tubo 3 y 4 se les agrego saliva; el tubo 3 dio un resultado positivo eso quiere decir que no hay almidón porque la amilasa de la saliva ha hidrolizado el almidón    transformándolo en glucosa. Por eso la reacción de fehling es ahora positiva. 

 

De una manera similar se pudo interpretar el resultado del tubo 4, en esta práctica nos da la reacción de polisacáridos negativa ya que el almidón se ha hidrolizado 

Esto se debe a que se oxido dando lugar a la reducción del sulfato de cobre 

• Reacción del lugol: 

 

La coloración producida por el lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de  la molécula de almidón Dando una reacción negativa. 

• Extracción del ADN: 

 

En esta práctica dio como resultado la muestra del ADN la extracción de la molécula por medio de un tejido animal, y su estructura. 

• CONCLUSIONES: 

• Las proteínas debido a su gran tamaño forman con el agua soluciones coloidales  
• La reacción biuret no ocurriría en los aminoácidos, porque estos no presentan enlaces peptídicos en su estructuras, y la reacción biuret reconoce los enlaces peptídicos de las proteínas. 
• La propiedad fundamental de las proteínas es su desnaturalización. 
• La enzima catalasa se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales 
• Para extraer el ADN es necesario abrir el núcleo esta molécula define nuestra información genética. 

• BLIBIOGRAFIA:  

• Bioquímica, por Mary K. Campbell, Shawn O. Farrell, disponible en books.google.com.co/books?isbn=9706863354 

• Aislamiento e identificación de diez cepas bacterianas desnitrificantes a partir de un suelo agrícola contaminado con abonos nitrogenados proveniente de una finca productora de cebolla en la Laguna de Tota, Boyacá, Colombia, por Joaquín L. Benavides López de Mes  Gladys M. Quintero, Olga Lucía Ostos Ortiz, disponible en: http://es.scribd.com/doc/50797879/Articulo-Cientifico-Ejemplo